Merhaba,

subprocess.call(r'C:\Users\user\AppData\Local\Temp\Temp1_ngrok-v3-stable-windows-amd64.zip\ngrok.exe')

Dosya yolu belirtirken r ekini başa getirmeyi unutmayın. Bu sayede olabilecek hatalardan korunursunuz.
İyi çalışmalar, JAI.solutions .